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ELISA試劑盒抗體反響使抗原固相化及原理
發(fā)布時(shí)間： 2017-11-21 點(diǎn)擊次數(shù)： 1957次ELISA試劑盒的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體可經(jīng)過共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物，ELISA試劑盒而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
（2）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體外表，可能是蛋白和聚苯乙烯外表間的疏水性部分相互吸附，并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性；
（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可依據(jù)參加底物的顏色反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且顏色反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因而，能夠按底物顯色的程度顯現(xiàn)實(shí)驗(yàn)成果。法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，ELISA試劑盒依據(jù)現(xiàn)已運(yùn)用的成果，認(rèn)為法具有活絡(luò)、特異、簡略、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特色。不只適用于臨床標(biāo)本的查看，并且因?yàn)橐惶熘畠?nèi)能夠查看幾百甚至上千份標(biāo)本,因而，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。
ELISA試劑盒因而含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,實(shí)驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn)，重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的作用于?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照耀（例如30W紫外燈，75cm照耀12小時(shí)），以添加其吸附性能。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，ELISA試劑盒而遍及的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。換言之，包被便是抗原或抗體結(jié)合到固相載體外表的進(jìn)程。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出，在這種情況下，直接包被作用不佳，能夠選用直接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，這以后經(jīng)過抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被，即用親和素先包被載體，然后參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí)，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
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