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ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌？
發(fā)布時間： 2014-05-18 點擊次數(shù)： 1466次elisa試驗中洗滌是一個*的部分，因為洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比，每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在zui后一步產(chǎn)生信號。用戶可以通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。而不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。所以說洗滌是ELISA試劑盒實驗中*的部分，操作人員應(yīng)該重視起來，不可馬虎大意。
ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌？
（1）浸泡式
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；
b.用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去）；
c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1～2分鐘，間歇搖動，浸泡時間不可隨意縮短；
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干；
e.重復(fù)操作c和d，洗滌3～4次（或按說明規(guī)定）。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%～0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
（2）流水沖洗式
流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為*，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。
ELISA試劑盒實驗中洗滌后為什么要靜置？
洗滌只是洗掉反應(yīng)中的非特異性吸附，可采用靜置或者振蕩的方式，靜置是讓洗滌液充分洗掉未結(jié)合的酶標(biāo)物或其他的物質(zhì).
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