服務(wù)熱線(xiàn)
021-54479081
021-54461587
-
單克隆抗體時(shí)動(dòng)物的選擇與免疫
發(fā)布時(shí)間： 2011-05-26 點(diǎn)擊次數(shù)： 2493次一、免疫
一般而言，抗原的純度不很重要，特別是免疫原性較強(qiáng)的抗原。免疫程序、劑量和方法是關(guān)系到是否能得到所需要的單抗體的關(guān)鍵之一。正常小鼠脾臟含有能產(chǎn)生各種不同抗體的B淋巴細(xì)胞，一只純種小白鼠估計(jì)能產(chǎn)生1.0×107~5.0×107種不同的抗體。因此一只正常的小白鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤融合，只能有千萬(wàn)分之一的機(jī)會(huì)獲得某一種特定抗體。所以為了提高得到某種雜交瘤的機(jī)會(huì)，必須加強(qiáng)免疫，使產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞大量增加。B淋巴細(xì)胞的不同發(fā)育階段對(duì)獲得陽(yáng)性雜交瘤也有很大影響。有人認(rèn)為處在轉(zhuǎn)化時(shí)期的B淋巴細(xì)胞可能更易于融合，而免疫以后7~8天，雖然是抗體產(chǎn)生的高峰時(shí)期，但形成有活力的雜交瘤細(xì)胞的可能反而減少。故一般認(rèn)為加強(qiáng)免疫后的第三天應(yīng)殺鼠取脾做細(xì)胞融合。
1. 可溶性抗原（蛋白質(zhì)） 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗氏*佐劑乳化，分多點(diǎn)小鼠皮下注射，總量為0.3ml～0.6ml，間隔3-5周再同樣注射一次，10天后，斷尾取血一滴，測(cè)抗體效價(jià)，選滴度高的小鼠做融合試驗(yàn)。一個(gè)月后可以經(jīng)靜脈（尾靜脈）給予無(wú)佐劑抗原0.2ml～0.4ml，3～4天后，殺死小鼠取脾做融合用。
2. 顆粒性抗原 如抗原來(lái)源方便，可以不加佐劑而增加免疫次數(shù)，縮短間隔時(shí)間。例如用羊紅血球免疫小白鼠，以1%濃度每只皮下注射0.2ml，每周2次，共免疫5-8次，取脾前3天，再免疫一次即可。有人認(rèn)為zui后一次免疫劑量要大，大到近于免疫耐受的程度更好。
二、動(dòng)物的選擇
目前應(yīng)用zui廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應(yīng)用zui廣，因?yàn)樗械男“资蠊撬枇鱿稻鶑腂alb/c小白鼠系誘導(dǎo)出來(lái)。Balb/c系小白鼠必須用純系的，雌雄均可，以8~12周齡為宜。大白鼠也可，能產(chǎn)生較多量的單抗體?，F(xiàn)在已經(jīng)在小鼠雜交瘤的基礎(chǔ)上，發(fā)展了小鼠－大鼠，小鼠－人以及人－人雜交瘤技術(shù)。