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ELISA試劑盒使用方法講解
發(fā)布時(shí)間： 2016-12-12 點(diǎn)擊次數(shù)： 2731次公司出產(chǎn)的ELISA試劑盒敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。試劑盒中試劑安穩(wěn)、易保留，操作簡潔，成果判斷較客觀等要素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗(yàn)的各領(lǐng)域中，檢查意圖:用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。合適檢查包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、安排勻漿等標(biāo)本。
ELISA試劑盒使用方法一
雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗刷，下同）。
2. 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。（一起做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。
4. 加底物液顯色：于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 停止反響：于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
6. 成果判定：可于白色布景上，直接用肉眼調(diào)查成果：反響孔內(nèi)色彩越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反響為無色或極淺，依據(jù)所呈色彩的深淺，以“+"、“-"號表明。也可測OD值：在ELISA檢查儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
ELISA試劑盒使用方法二
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃；
2.次日洗刷3次；
3.加必定稀釋的待檢樣品（不知道抗體）0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷；
4.（一起做空白、陰性及陽性孔對照）于反響孔中，參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗刷；
6.’zui終一遍用DDW洗刷。
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